滨松中国成像大赛

往届参赛作品

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衣藻鞭毛中荧光蛋白转移的TIRF成像

参赛者信息:孟丹

作者单位:清华大学

所用相机:Flash 4.0 V2 USB(C11440-22CU)

成像方法:TIRF成像,高速运动荧光成像

显微镜物镜:100x TIRF Oil,NA 1.49

拍摄条件:50帧/秒,20ms曝光时间

详细描述

 表达YFP的衣藻的鞭毛被基底黏住,采用TIRF照明时,与基底不在一个焦平面的衣藻细胞体将不会被倏逝波激发产生荧光信号。使得我们可以采用更短的曝光时间和更快的帧速采集得到鞭毛中荧光蛋白的移动。而为了方便的计算来回两个方向荧光蛋白标记的颗粒状结构的转运速度,我们可以采用Reslice方法从视频中方便地得到x-t维图片,然后代表每个荧光颗粒的斜线的斜率即为其转运的速度
    下图
BC显示了两种显示效果比较好的后处理结果(关于如何从原始数据得到这样的图像后处理结果,可参考http://www.hamamatsu.com.cn/activity/10001/news/10032/index.html)。


扩展阅读
图B类似的后处理方法在神经生物学研究中的应用可参考下列文献的Figure 2,3,5和6:

Lasiecka, et. al., Neuronal early endosomes require EHD1 for L1/NgCAM trafficking, J Neurosci. 2010 Dec 8; 30(49): 16485–16497.