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转盘共聚焦成像

TIRF相同,转盘共聚焦技术也是为了获得z轴上的分辨率。从效果上,两者的差别在于,转盘共聚焦的z轴分辨率并没有TIRF高,只有约500-800nm,但转盘共聚焦没有TIRF只能看表面的限制。

而在与激光扫描共聚焦的对比中,转盘共聚焦的在同样分辨率的情况下速度较快,经常被用来进行三维图像的实时采集,在神经、发育等研究领域有着非常重要的作用。虽然现在激光扫描共聚焦中如果采用共振扫描振镜也可以达到比较高的速度(30fps @ 512x512),但其价格相对转盘共聚焦偏高。不过因为激光照明被同时分散在几千个点上,所以转盘共聚焦的照明光强不及激光扫描共聚焦,一般采用较大的针孔,信噪比也差一些。转盘共聚焦一般用在需要三维高速成像的场合。

转盘共聚焦对于相机的要求主要有两点,一是灵敏度高,二是帧速快。这主要是因为落在相机芯片上的光都经过了针孔,信号偏弱,且如果灵敏度下降导致拍照的帧速下降,转盘共聚焦就失去了其相对于激光扫描共聚焦的优势。所以转盘共聚焦需要采用灵敏度高帧速快的相机如EMCCD和高端sCMOS等。

推荐相机
  ORCA-Flash4.0 V2 ImagEM X2  
-10°/-30°深制冷且>70%QEsCMOS   业界帧速最高(70fps @ 512x512)的背照式EMCCD

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