表皮角质形成细胞的3D活细胞成像分析

2025年8月18日发布

School of Bioscience and Biotechnology下属Tokyo University of Technology的Cosmetics Course之中的The Laboratory for Evolutionary Cell Biology of Skin。为阐明表皮屏障的形成机理,有必要对表皮进行三维成像。为此,他们引进了我们的MAICO MEMS共聚焦装置。

 

我们采访了该实验室的Takeshi Matsui教授,他介绍了MAICO MEMS共聚焦装置的引进背景、使用感受以及未来研究的展望。

 

当前研究

您能介绍一下您的研究吗?

 

我们的实验室研究皮肤适应性进化的机理,尤其重点研究表皮屏障的形成方式。皮肤可分为表皮、真皮和皮下组织三层。表皮是由多层组成的复层鳞状上皮,其最外层是由死细胞组成的角质层(角质化层)。这层角质层是在古代两栖动物从水中向陆地过渡阶段进化而来的,它是陆生脊椎动物在陆地上生存的关键屏障。角质层是由一种特殊类型的细胞死亡形成的,被称为角质细胞凋亡,发生于颗粒层最顶部的SG1细胞中。我们的实验室已经开发了一种活细胞成像系统,可利用光学显微镜观察和了解角质细胞凋亡过程。 

Takeshi Matsui教授

皮肤表皮组织的剖面图

表皮3D活细胞成像面临的挑战

使用MAICO的活细胞成像系统

 

Matsui教授还使用我们的ORCA®-Fusion BT进行常规落射荧光成像。

表皮活细胞成像面临哪些挑战?

 

鉴于我们研究的表皮具有多层结构,我们需要以三维方式对其结构进行成像。常规荧光显微镜和相机无法清晰地捕捉到这种3D结构,我们必须使用共聚焦显微镜。但共聚焦显微镜价格昂贵,因此我们的实验室难以购置一台。以前,我们不得不依赖于研究所和大学的共享设备。

 

我们的实验需要利用延时成像来观察颗粒层细胞的角质细胞凋亡过程,有时需要连续几天观察才能成像。但共享设备采用的是预约制,且使用时间有限。此外,每次成像都需要花费很长时间进行设置,所以我们需要一个这样孵化器,不仅可以培养细胞,还必须配置多点延时成像的设置。

 

鉴于以上情况,我们希望自己的实验室能够安装共聚焦显微镜,以便我们做实验时不受时间限制,也无须重复设置程序。

引进MAICO MEMS共聚焦装置的决定性因素

是什么让您决定引进MAICO的?

 

我们一直在使用滨松光子学株式会社的sCMOS相机进行荧光成像。在我们寻找共聚焦显微镜的过程中,一位销售代表向我们介绍了新发布的MAICO MEMS共聚焦装置,据说只需添加该装置即可将现有显微镜转变为共聚焦显微镜。我们首先要求当场演示。

 

虽然该装置价格很合理,但最初我很担心它的成像质量和灵敏度,我记得在演示过程中我非常惊讶,因为它竟然可以捕捉到不逊于其他公司共聚焦显微镜的高质量图像。基于以下几个因素,我们最终决定引进该装置:价格合理、成像质量与其他共聚焦显微镜相当、可以从一个波长开始,然后通过其模块化亚基结构添加更多波长,以及小型化的设计。

另一个决定性因素则是MAICO的独特功能可同时进行多波长观察,且无串扰。我们的实验室要进行活细胞成像,所以我们希望同时捕获多个波长。这往往导致波长泄漏问题,但MAICO解决了这个问题,对我们的工作大有裨益。

 

最近,除MAICO MEMS共聚焦装置外,我们还完成了多点延时成像用XY工作台和保持焦点位置用Z漂移补偿器的安装。现在我们终于有了共聚焦延时成像的完整设置,我们即将开始实际成像操作。

成像示例

小鼠皮肤表皮颗粒层细胞的Z-stack图像

 

从表达EGFP的小鼠皮肤中分离出颗粒层细胞片后,使用Hoechst 33342对其进行染色,进而得到Z-stack图像。

 

数据提供:Takeshi Matsui教授。所属机构:School of Bioscience and Biotechnology下属Tokyo University of Technology的The Laboratory for Evolutionary Cell Biology of Skin

MAICO MEMS共聚焦装置的可用性

您如何看待MAICO的可用性?

 

我发现它非常人性化,操作也很简单。例如,针孔设置虽然无法进行精细调整,但可以分为S、M、L三个级别进行设置,简单易懂。如此一来,就能够很好地向每年新加入实验室的新生解释其操作过程了。此外,为了使每个镜头均达到上佳成像条件,滨松光子学株式会社提供了分辨率模拟器,我发现这个模拟器非常有用,让我们可以根据样品结构和厚度调整Z切片的厚度,同时参考模拟结果。

研究展望

能否谈谈未来的研究展望?

 

目前,我们主要利用人类和两栖动物的表皮样品进行实验。未来,我们希望观察和研究两栖动物和爬行动物的表皮,以研究物种特异性差异与进化机理。我们计划将共聚焦显微镜图像与电子显微镜分析和遗传信息相结合,以开展更加详细的调查研究。

 

鉴于我们的实验室属于皮肤病学研究领域,有时我们会与皮肤科医生和化妆品制造商合作开展各种研究项目,包括特应性皮炎(皮肤屏障受损)研究与化妆品成分评估。我目前正在开发阐明表皮屏障形成机理用活细胞成像系统,该系统也有望用于这些研究。因此,我们同时致力于开发新的评估系统/仪器。

Researcher profile

Takeshi Matsui
Professor, Laboratory for Evolutionary Cell Biology of Skin, Cosmetics Course, School of Bioscience and Biotechnology, Tokyo University of Technology

Mar. 2000

Ph. D., Graduate School of Medicine and Faculty of Medicine, Kyoto University

Apr. 2000

Group Leader, Research Group of Dermatology, KAN Research Institute, Inc.

Oct. 2006

Industry-Academia-Government collaboration Researcher, Kyoto University

Nov. 2006

Project Researcher, Graduate School of Medicine, Osaka University

Apr. 2007

Assistant Professor, Laboratory of Biological Science, Graduate School of Frontier Biosciences, Osaka University

Nov. 2007

Lecturer, Medical Top Track (MTT) Program, Medical Research Institute, Tokyo Medical and Dental University

Apr. 2011

Assistant Professor, Institute for Integrated Cell-Material Sciences (iCeMS), Kyoto University

Apr. 2013

Senior Researcher, Laboratory for Skin Homeostasis, RIKEN Center for Integrative Medical Sciences

Apr. 2016

Deputy Team Leader, Laboratory for Skin Homeostasis, RIKEN Center for Integrative Medical Sciences

Apr. 2021

Professor, Laboratory for Evolutionary Cell Biology of Skin, Cosmetics Course, School of Bioscience and Biotechnology, Tokyo University of Technology

* 本页显示的内容基于 2024 年 10 月进行的采访。

其他案例研究

Research Institute of Electrical Communication  (RIEC)下属Tohoku University的The Nano-Integration Devices and Systems Laboratory专门从事类脑非冯诺伊曼计算及相关硬件研究的基础技术。Hideaki Yamamoto 副教授的研究小组(Nano-Integration Neurocomputing Systems Group)在这个实验室里结合半导体精密加工、神经细胞培养和数学建模,开发出自下而上分析大脑功能的新体外系统。在这些体外系统中,培养的神经元偶尔聚集形成3D结构。该小组引进了针对这些聚集的神经元进行3D成像的 MAICO MEMS共聚焦装置。

MAICO的概述和概念。

MAICO(包括其子装置结构)的出众特点介绍如下。

采用MAICO成像时可减少波长之间的透光率,这是在多波长同步观察时会遇到的一个问题。我们将介绍如何减少渗出。

MAICO系列包括具有不同波长和灵敏度的装置。

解释共聚焦显微镜的 原理,借助这种显微镜可以减轻图像模糊,并提高图像对比度和分辨率。

MAICO成像示例视频。

此处列出了有关MAICO的常见问题。

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